1適用范圍

　　適用于無(wú)塵車(chē)間沉降菌，浮游菌工作臺(tái)面，工人手的微生物檢測(cè)工作。

　　2定義

　　2.1浮游菌：懸浮在空氣中的活的微生物粒子，使用專(zhuān).用的儀器，通過(guò)專(zhuān)門(mén)的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌活數(shù)。

　　2.2沉降菌：空氣中的活的微生物粒子，通過(guò)專(zhuān)門(mén)的培養(yǎng)基，在適宜的生長(zhǎng)條件下繁殖到可見(jiàn)的菌活數(shù)。

　　2.3CFU：菌落形成單位colony-formingunit。

　　3測(cè)試方法

　　3.1試劑/培養(yǎng)基的配制

　　3.1.1根據(jù)采樣數(shù)量，按規(guī)定要求配制好0.9%生理鹽水和大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基，將配制好的培養(yǎng)基分裝到三角瓶中膠塞密封并用白紙包好；用移液管分裝0.9%生理鹽水10ml至試管中膠塞密封并用白紙包好，將相應(yīng)數(shù)量移液管，棉拭子包好；將平皿放入不銹鋼消.毒筒中，所有物品經(jīng)121℃高壓蒸氣滅.菌15min；

　　3.1.2滅.菌結(jié)束后部分培養(yǎng)基倒平皿，將用于檢測(cè)浮游菌、沉降菌，如非當(dāng)日使用需在2~8℃低溫保存。將部分培養(yǎng)基置于45±5℃的恒溫水浴中，生理鹽水管待冷卻后可到無(wú)塵車(chē)間進(jìn)行采樣；

　　3.2沉降菌采樣步驟如下：

　　3.2.1將培養(yǎng)基凝固了的培養(yǎng)皿按采樣位置作好標(biāo)記；

　　3.2.2布置采樣點(diǎn)時(shí)，應(yīng)盡量避開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口；

　　3.2.3將培養(yǎng)皿放置在離地0.8～1.5m左右的工作臺(tái)面上，揭開(kāi)培養(yǎng)皿蓋子，使培養(yǎng)基暴露在空氣中采樣30min；

　　3.2.4全部采樣結(jié)束后，將培養(yǎng)皿蓋上并倒置。

　　3.2.5培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過(guò)程造成的影響，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。

　　3.3浮游菌采樣步驟如下：

　　3.3.1采樣前，先用消.毒劑消.毒采樣器的頂蓋，轉(zhuǎn)盤(pán)及罩子的內(nèi)外面；

　　3.3.2開(kāi)啟浮游菌采樣器，使儀器中的殘余消.毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量并根據(jù)采樣量調(diào)整設(shè)定采樣參數(shù)，每個(gè)采樣點(diǎn)采樣不少于500L；

　　3.3.3布置采樣點(diǎn)時(shí)，采樣點(diǎn)位置應(yīng)離地0.8～1.5m左右，送風(fēng)口測(cè)點(diǎn)位置應(yīng)離開(kāi)送風(fēng)面30cm左右；

　　3.3.4用消.毒劑對(duì)手進(jìn)行消.毒后，將培養(yǎng)皿放入轉(zhuǎn)盤(pán)內(nèi)，蓋上多孔取樣頭蓋子，揭開(kāi)保護(hù)蓋，開(kāi)啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣；

　　3.3.5采樣結(jié)束后，對(duì)已采樣的培養(yǎng)皿作上標(biāo)記；

　　3.3.6全部采樣結(jié)束后，用消.毒劑輕輕噴射儀器內(nèi)罩子的內(nèi)壁和轉(zhuǎn)盤(pán)；

　　3.3.7培養(yǎng)皿在用于檢測(cè)時(shí)，為避免培養(yǎng)皿運(yùn)輸或搬動(dòng)過(guò)程造成的影響，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)，每次或每個(gè)區(qū)域取1個(gè)對(duì)照皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果應(yīng)無(wú)菌落生長(zhǎng)。

　　3.4工人手微生物采樣按以下步驟進(jìn)行：

　　3.4.1將滅.菌生理鹽水管作好標(biāo)記；

　　3.4.2用消.毒劑對(duì)手進(jìn)行消.毒，取出滅.菌棉拭子，打開(kāi)滅.菌生理鹽水管塞子，將棉拭子浸入滅.菌生理鹽中，待棉拭子濕透后，在試管壁上輕壓數(shù)下，除.去過(guò)多的水分；

　　3.4.3要求被檢人五指并攏，將浸有滅.菌生理鹽水的棉拭子在手上來(lái)回涂擦10次，將整個(gè)手掌面積涂抹到；

　　3.4.4將棉拭子與手接觸的部份去掉，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中，送檢；

　　3.4.5每對(duì)一個(gè)采樣點(diǎn)采樣結(jié)束后，應(yīng)用消.毒劑對(duì)手剪鉗和手進(jìn)行消.毒。

　　3.4.6采樣結(jié)束后，另取一根棉拭子，將與手接觸部分去掉，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中作陰性對(duì)照。

　　3.5工作臺(tái)面微生物采樣按以下步驟進(jìn)行：

　　3.5.1先將滅.菌生理鹽水管標(biāo)記好標(biāo)記號(hào)，與所取的工人手相對(duì)應(yīng)；

　　3.5.2實(shí)驗(yàn)員帶上無(wú)菌手套，用消.毒劑將手，定位架進(jìn)行消.毒，必要時(shí)用酒精燈燒灼定位架，加速酒精揮發(fā)；

　　3.5.3選定采樣位置，固定好定位架；

　　3.5.4取出滅.菌棉拭子，打開(kāi)滅.菌生理鹽水管塞子，將棉拭子浸入滅.菌生理鹽中，待棉拭子濕透后，在試管壁上輕壓數(shù)下，去.除過(guò)多的水分；

　　3.5.5用棉拭子在定位架內(nèi)來(lái)回涂抹10次；

　　3.5.6將棉拭子與手接觸的部份去.除，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中，送檢；

　　3.5.7每一個(gè)采樣點(diǎn)采樣結(jié)束后，應(yīng)用消.毒劑對(duì)手，定位架和剪鉗進(jìn)行消.毒。

　　采樣結(jié)束后，另取一根棉拭子，將與手接觸部分去.除，棉拭子頭掉入滅.菌生理鹽水管中作陰性對(duì)照。

　　3.6采樣后的微生物檢測(cè)

　　3.6.1以培養(yǎng)皿采樣的，將培養(yǎng)皿倒置，于34±1℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，計(jì)數(shù)；

　　以采樣管采樣的，將采樣管在超聲波清洗機(jī)超聲5min，混勻后在潔凈工作臺(tái)上將已稀釋成10倍數(shù)濃度的稀釋液；用已滅.菌的移液管吸取1ml稀釋液注入無(wú)菌平皿中，立即傾注培養(yǎng)基、混勻、凝固，每個(gè)稀釋度傾注2塊平板，倒置34±1℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，計(jì)數(shù)；

　　3.7結(jié)果判定

　　3.7.1工作臺(tái)面菌量應(yīng)≦10cfu/cm2（即≦250cfu/25cm2）；

　　3.7.2工人手菌量應(yīng)≦300cfu/hand；

　　3.7.3沉降菌數(shù)100000級(jí)應(yīng)≦10個(gè)/皿；

　　浮游菌濃度100000級(jí)應(yīng)≦500個(gè)/m3(≦125個(gè)/250L)；